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甘油三酯（ TG） 含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格：100T/96S 產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：自備，取玻璃空瓶，加入 60mL 正庚烷，60mL 異丙醇，蓋緊后混勻，4℃保存。

試劑二：液體 3mL×1 瓶，4℃保存。試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑六：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 瓶，臨用前加 5mL 試劑一，即 1mg/mL 甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：

TG 是長(zhǎng)鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細(xì)胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。 測(cè)定原理： 用異丙醇抽提取 TG，KOH 皂化 TG 后水解生成甘油及脂肪酸，過(guò)碘酸氧化甘油生成甲醛， 在氯離子存在下甲醛與乙酰丙酮縮合生成黃色物質(zhì)，在 420 nm 有特征吸收峰，其顏色的深淺與 TG 含量成正比。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量比色皿/96 孔板、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、雙蒸水、125mL 玻璃空瓶。

操作步驟:

一、TG 的提?。?/p>

1、 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清待測(cè)。

2、 細(xì)胞、細(xì)菌：先收集 400-500 萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加 1mL 試劑一，超聲波破碎

1min（強(qiáng)度 20％，超聲 2s，停 1s），8000g， 4℃離心 10min，取上清待測(cè)。

3、 血清（漿）等液體樣品：直接測(cè)定。二、測(cè)定操作：

1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 420 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.水浴鍋預(yù)熱到 65℃。

空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管

雙蒸水（µL）40

標(biāo)準(zhǔn)液（µL）40

TG 待測(cè)液（µL）40

試劑一（µL）125125125

試劑二（µL）252525

加試劑一后充分混勻，再加試劑二，劇烈振蕩 30s，靜置，待分層后取上層溶液 15µL，置于新的 EP 管中。

3.甘油三酯含量測(cè)定：

空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管

上層溶液（µL）151515

試劑三 （µL）505050

試劑四（µL）151515

充分混勻，65℃水浴 3min

試劑五（µL）505050

試劑六（µL）505050

充分混勻，65℃水浴 15min

轉(zhuǎn)移至微量比色皿/96 孔板測(cè)定 420nm 處吸光度，記為 A 空，A 標(biāo)和 A 測(cè)。注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

三、計(jì)算公式：

1.血清（漿）中甘油三酯含量：

TG 含量（mg/dL）=C  標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）

=（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）

C 標(biāo)準(zhǔn)品：1mg/mL；100：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1dL=100 mL。

2.組織中甘油三酯含量：

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

TG 含量（mg/ mg prot）= C  標(biāo)準(zhǔn)品×V×（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷（Cpr×V）

=（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷ Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算

TG 含量（mg/ g 鮮重）=C  標(biāo)準(zhǔn)品×V×（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷W

=（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷ W

C 標(biāo)準(zhǔn)品：1mg/mL ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；V：加入試劑一的體積，

1mL。

3.細(xì)胞、細(xì)菌中甘油三酯含量：

TG 含量（mg/104 cell）=C 標(biāo)準(zhǔn)品×（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷細(xì)菌或細(xì)胞密度

=（A 測(cè)－A 空）÷（A 標(biāo)－A 空）÷細(xì)菌或細(xì)胞密度

C 標(biāo)準(zhǔn)品：1mg/mL；細(xì)菌或細(xì)胞密度：104 cell /mL。

注意事項(xiàng)：

1.試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開(kāi)后應(yīng)該及時(shí)蓋緊。

2.加試劑二后需劇烈震蕩，使待測(cè)液中甘油三酯得到充分提取。

3.最低檢出限為 100µ mol/L。

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